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实时荧光定量PCR仪的技术原理详解

作者:博科再生医学浏览:284文章来源:www.biobaselb.cn时间:2022-05-14

信息摘要:

PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的,随着反应循环数的增加,PCR反应不再以指数方式生成模板,从而进入平台期。在传统的PCR 中,常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的扩增产物,因此用此终点法对

  实时荧光定量PCR仪的技术是指在PCR反应体系中加入荧光基因,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
  PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的,随着反应循环数的增加,PCR反应不再以指数方式生成模板,从而进入平台期。在传统的PCR 中,常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的扩增产物,因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。
  在实时荧光定量PCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲 线。在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和zui终的平台期,因此可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板zui初的含量。

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